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　　隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光定量PCR已成為一種廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)工具。相比于傳統(tǒng)的PCR方法，熒光定量PCR能夠快速、準(zhǔn)確地定量檢測(cè)目標(biāo)基因的表達(dá)水平，是研究基因表達(dá)、疾病診斷和藥物篩選等方面的重要手段。本文將介紹熒光定量PCR的原理、方法和主要應(yīng)用領(lǐng)域。

　　熒光定量PCR是一種基于PCR技術(shù)的定量檢測(cè)方法。PCR是通過(guò)不斷復(fù)制擴(kuò)增DNA片段來(lái)檢測(cè)目標(biāo)序列的方法，而熒光定量PCR則是在PCR過(guò)程中引入熒光探針或染料，以實(shí)現(xiàn)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量分析。其原理主要包括兩個(gè)方面：

　　基于PCR擴(kuò)增:熒光定量PCR與傳統(tǒng)PCR方法一樣，利用熱循環(huán)反應(yīng)（PCR）迅速擴(kuò)增DNA模板，但熒光定量PCR在反應(yīng)過(guò)程中加入了熒光探針或染料。PCR反應(yīng)的每個(gè)循環(huán)（cycle）都是由一系列溫度變化組成，包括解旋、退火和擴(kuò)增等步驟，使DNA雙鏈分離、引物和熒光探針結(jié)合并擴(kuò)增產(chǎn)物。

　　基于熒光信號(hào)的定量分析：熒光定量PCR通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量分析。熒光探針或染料會(huì)與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合，在熒光信號(hào)的作用下進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，從而在PCR循環(huán)的不同階段準(zhǔn)確測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量。

　　熒光定量PCR的方法主要包括兩種：SYBR Green I染料法和TaqMan探針?lè)ā?/div>